TNC是心脏发育的标志基因,但该基因在斑马鱼中的表达尚未研究.斑马鱼TNC基因基因的开放阅读框含有5132 bp,编码1710个氨基酸,采用生物信息学结合PCR的方法获得了斑马鱼TNC基因的片段.将所得的PCR片段插入原核表达载体pGEX-4T-1中,并将重组质粒(pGEX-4T-1-TNC)转化大肠杆菌B1221;通过IPTG诱导表达GST-TNC融合蛋白,通过尿素洗涤沉淀蛋白并切胶回收纯化融合蛋白,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.Western blot和免疫组化分析表明,制备的抗体具有良好的高效价性和特异性.利用该抗体进行斑马鱼胚胎抗体染色分析表明,TNC蛋白在心脏组织中特异表达.
作者：张湘涛；夏机良；张义；袁婺洲；王跃群；李永青；邓云；莫小阳；江志钢；吴秀山；万永奇
来源：激光生物学报 2010 年 19卷 5期
