lbe是已经证明的心脏标记基因.为了深入研究lbe在心脏发育中的功能,需要获得lbe蛋白并制备其抗体.首先提取野生型成体果蝇的总RNA,反转录获得其cDNA文库,通过PCR克隆出lbe编码区序列,将其连接到pET-28a原核表达载体上.经酶切及测序鉴定后,质粒构建成功.将重组质粒(pET-28a-lbe)转化大肠杆菌菌株Rosseta,用IPTG诱导表达出融合蛋白,经Ni-IDA凝胶柱纯化后,最后将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备lbe多克隆抗体,并用Western blotting检测抗体的效价和特异性.结果显示获得了lbe原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗lbe多克隆抗体,为lbe功能的进一步研究奠定了基础.
作者：徐腊梅；朱玲；刘腾；吴秀山；邓云；袁婺洲
来源：激光生物学报 2012 年 21卷 2期
