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目的应用基因工程技术获得人工设计的IN-1重组单链抗体(IN-1-scFv)的cDNA克隆.方法参照genebank中发表的IN-1抗体的轻链重链序列,重新设计适于在大肠杆菌中表达的目的基因片段,将该基因双链分成35个小片段合成,经退火、复性连接成目的片段后,克隆到经过BamHI和HindIII双酶切的克隆载体pUC18中,并转化大肠杆菌DH5a,抽提重组子pUC18/744进行克隆PCR、酶切鉴定及测序分析.结果测序结果证明获得的基因序列与实验设计仅差一个碱基.结论正确设计并合成了IN-1重组单链抗体(IN-1-scFv)的cDNA,为深入研究其生物活性奠定了基础.

作者:王勇;郑伟;吴安华;方谨;邵春波;刘恒威;李志刚;王运杰

来源:解剖科学进展 2002 年 8卷 4期

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王勇;郑伟;吴安华;方谨;邵春波;刘恒威;李志刚;王运杰
来源:
解剖科学进展 2002 年 8卷 4期
标签:
IN-1重组单链抗体 基因合成 克隆
目的应用基因工程技术获得人工设计的IN-1重组单链抗体(IN-1-scFv)的cDNA克隆.方法参照genebank中发表的IN-1抗体的轻链重链序列,重新设计适于在大肠杆菌中表达的目的基因片段,将该基因双链分成35个小片段合成,经退火、复性连接成目的片段后,克隆到经过BamHI和HindIII双酶切的克隆载体pUC18中,并转化大肠杆菌DH5a,抽提重组子pUC18/744进行克隆PCR、酶切鉴定及测序分析.结果测序结果证明获得的基因序列与实验设计仅差一个碱基.结论正确设计并合成了IN-1重组单链抗体(IN-1-scFv)的cDNA,为深入研究其生物活性奠定了基础.