目的 设计特异性shRNA并检测其对小鼠L929成纤维细胞Smad3基因的抑制作用.方法 根据小鼠Smad3 mRNA,编码3种不同序列shRNA.shRNA1起始位置为第495位核苷酸,GC含量为42.1％；shRNA2起始位置第562位核苷酸,GC含量为52.6％; shRNA3起始位置第1473位核苷酸,GC含量为52.6％.3种shRNA被合成进质粒pGenesil1.1.合成后的质粒pGenesil 1.1 Smad3-1,pGenesil1.1 Smad3-2和pGenesil1.1 Smad3-3分别转染体外培养的小鼠L929成纤维细胞,同时设立空白对照组和负对照组.48和72h后通过Real time PCR和Western blot检测其对Smad3基因表达的影响.结果 3种shRNA对Smad3基因在小鼠L929成纤维细胞表达在48和72h均有不同程度的抑制作用.其中,以shRNA2和shRNA3抑制效果最为明显.结论 合成特异性的shRNA可以有效抑制Smad3基因在小鼠L929成纤维细胞的表达.
作者：董雪松；孙裕强；刘伟；刘志
来源：解剖科学进展 2013 年 19卷 1期
