目的:构建含微小RNA-327(miRNA-327)基因的腺病毒载体,并观察其在H9C2心肌细胞中的转染效率.方法:利用聚合酶链反应(PCR)法钓取目的基因miRNA-327,并将目的基因与穿梭载体GV202连接形成miRNA-327腺病毒表达载体.经酶切及测序鉴定后,将构建的miRNA-327腺病毒表达载体与包装质粒共转染到人胚肾293细胞,再通过Cre/loxP重组酶系统以获得重组腺病毒,并对其进行扩增、纯化及滴度测定.最后将构建成功的重组腺病毒载体转染H9C2心肌细胞48 h,并通过荧光显微镜以及流式细胞仪测定其转染效率.结果:双酶切与测序结果证明了大鼠miRNA-327腺病毒载体构建成功,且最终获得滴度为2×1010 PFU/ml的病毒液.转染心肌细胞48 h后倒置荧光显微镜观察结果显示,腺病毒转染效率为90.15％±5.15％,流式细胞仪检测结果显示其转染效率为85.46％±3.08％.结论:成功构建了含miRNA-327基因的重组腺病毒载体,其在H9C2心肌细胞中具有较高的转染效率.
作者：李奇；杨俊；杨简；杨英；郑涛；刘晓雯
来源：解剖学杂志 2019 年 42卷 3期
