目的:探讨内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)分离培养鉴定方法及其生物学特性.方法:采用梯密度离心法结合差速贴壁法分离获取大鼠骨髓单核细胞,培养于EGM-2-MV-SingleQuots内皮细胞培养液中,分别取48 h内贴壁细胞(早期EPCs)和48 h后贴壁细胞(晚期EPCs),在倒置显微镜下观察细胞形态,应用流式细胞术鉴定EPCs表面抗原标志CD34,CD133和血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2),激光共聚焦检测EPCs吞噬功能,透射电镜观察EPCs内部超微结构.结果:单核细胞接种后呈小圆形,早期EPCs呈长梭形,晚期以纺锤形为主,培养7d后有明显干细胞集落;增殖至第6代以后,形态开始逐渐接近于内皮细胞,并出现管腔样结构.内皮祖细胞表面标志CD34,CD133和VEGFR-2均呈阳性表达,能吞噬Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白并结合FITC标记的凝集素-1.透射电镜可观察到内皮细胞特征性细胞器Weible-Palade小体.结论:梯密度离心法结合差速贴壁法能够成功地从骨髓中分离、纯化、培养出内皮祖细胞,其增殖能力强,数量充足,生物学特性稳定.
作者：陆耀良；康涛；李晓强；韩松
来源：江苏大学学报（医学版） 2013 年 23卷 6期
