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目的:探讨Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶(typeⅡcGMP-dependent protein kinase,PKGⅡ)对血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)介导的人胃癌HGC-27细胞增殖的影响及其作用机制.方法:应用编码PKGⅡcDNA的腺病毒(Ad-PKGⅡ)感染HGC-27细胞,使其高表达PKGⅡ,并以特异性激动剂8-pCPT-cGMP激活PKGⅡ.应用血管内皮生长因子-A(vascular endothelial growth factor A,VEGF-A)激活VEGFR2.MTT法检测细胞增殖;蛋白质印迹法检测p-VEGFR2、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated-protein kinase B,p-PKB/p-Akt)和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(phosphorylated-extracellular signal-regulated kinase,p-ERK1/2)表达;免疫共沉淀法检测PKGⅡ与VEGFR2的结合;免疫沉淀法联合蛋白质印迹法检测PKGⅡ对VEGFR2丝氨酸/苏氨酸(Serine/Threonine,Ser/Thr)的磷酸化作用.结果:VEGF-A可促进HGC-27细胞增殖,并诱导胞内p-VEGFR2、p-Akt和p-ERK1/2表达水平明显升高;以Ad-PKGⅡ感染HGC-27细胞使其高表达PKGⅡ并激活后,VEGF-A引起的细胞增殖受到明显抑制,p-VEGFR2、p-Akt和p-ERK1/2表达水平显著降低;PKGⅡ可与VEGFR2相互作用,使后者丝氨酸/苏氨酸磷酸化.结论:激活的PKGⅡ可通过使VEGFR2发生丝氨酸/苏氨酸磷酸化

作者:章伟慧;伍敏;庞吉;蓝婷;陶燕;吴燕;陈永昌

来源:江苏大学学报(医学版) 2016 年 26卷 2期

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作者:
章伟慧;伍敏;庞吉;蓝婷;陶燕;吴燕;陈永昌
来源:
江苏大学学报(医学版) 2016 年 26卷 2期
标签:
血管内皮生长因子受体-2 Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶 细胞增殖 胃癌HGC-27细胞 vascular endothelial growth factor receptor 2 type Ⅱ cGMP-dependent protein kinase cell proliferation gastric cancer cell line HGC-27
目的:探讨Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶(typeⅡcGMP-dependent protein kinase,PKGⅡ)对血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)介导的人胃癌HGC-27细胞增殖的影响及其作用机制.方法:应用编码PKGⅡcDNA的腺病毒(Ad-PKGⅡ)感染HGC-27细胞,使其高表达PKGⅡ,并以特异性激动剂8-pCPT-cGMP激活PKGⅡ.应用血管内皮生长因子-A(vascular endothelial growth factor A,VEGF-A)激活VEGFR2.MTT法检测细胞增殖;蛋白质印迹法检测p-VEGFR2、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated-protein kinase B,p-PKB/p-Akt)和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(phosphorylated-extracellular signal-regulated kinase,p-ERK1/2)表达;免疫共沉淀法检测PKGⅡ与VEGFR2的结合;免疫沉淀法联合蛋白质印迹法检测PKGⅡ对VEGFR2丝氨酸/苏氨酸(Serine/Threonine,Ser/Thr)的磷酸化作用.结果:VEGF-A可促进HGC-27细胞增殖,并诱导胞内p-VEGFR2、p-Akt和p-ERK1/2表达水平明显升高;以Ad-PKGⅡ感染HGC-27细胞使其高表达PKGⅡ并激活后,VEGF-A引起的细胞增殖受到明显抑制,p-VEGFR2、p-Akt和p-ERK1/2表达水平显著降低;PKGⅡ可与VEGFR2相互作用,使后者丝氨酸/苏氨酸磷酸化.结论:激活的PKGⅡ可通过使VEGFR2发生丝氨酸/苏氨酸磷酸化