目的 为了探讨乙型肝炎病毒(HBV)X基因与慢性乙型肝炎及肝癌发生的关系,构建HBV X 基因(hepatitis B virus X gene,HBx)真核表达载体及其肝癌(HCC)细胞系HepG2瞬转模型,并检测HBx对HepG2细胞表型的影响.方法 以 pCMV-HBx为模板,PCR法扩增HBx 基因编码区全长序列,将其克隆至pcDNA3.1-Flag真核表达载体中,构建重组真核表达载体pcDNA3.1-Flag-HBx,转染至HepG2细胞;Western印迹法检测细胞中HBx蛋白的表达水平;5-溴尿苷(5-溴脱氧尿嘧啶核苷,5-bromo-2′-deoxyuridine,BrdU)标记法检测转染HBx后细胞DNA合成变化;细胞周期检测试剂盒( CycleTESTTM PLUS DNA Reagent Kit) 检测转染HBx后细胞周期的变化;Annexin Ⅴ-APC/7-AAD法检测转染HBx后细胞凋亡情况.结果 重组真核表达载体pcDNA3.1-Flag-HBx经双酶切和测序证明构建正确,转染该载体的HepG2细胞可检测到HBx蛋白的表达;与转染空质粒pcDNA3.1-Flag的细胞相比,细胞增殖能力增强,而细胞凋亡比率下降.结论 成功构建了HBx 基因真核表达载体,并研究了HBx 对细胞表型的影响,为进一步探索HBx 参与HBV 引发HCC的分子机制奠定了基础.
作者：刘玉玲；林巍然；郭英飞；杨冬；姜颖
来源：军事医学 2012 年 36卷 12期
