目的 探讨骨膜蛋白调控人脐带来源间充质干细胞(hUC?MSC)向成骨细胞分化的作用.方法 培养并鉴定hUC?MSC,利用慢病毒载体构建稳定敲低POSTN基因的hUC?MSC(sh?POSTN?MSC)和对照组hUC?MSC(sh?NC?MSC),流式细胞术检测细胞表面标志物,油红O和碱性磷酸酶(ALP)染色比较两组细胞体外成脂和成骨诱导分化能力,实时荧光定量PCR(qRT?PCR)检测成脂分化关键转录因子和成骨分化标志物表达的差异.结果 培养的sh?NC?MSC和sh?POSTN?MSC表面标志物均为CD73+/CD90+/CD105+/CD14-/CD34-/CD45-,POSTN基因敲低后不影响hUC?MSC表面标志物的表达.成脂诱导后,sh?NC?MSC和sh?POSTN?MSC经染色均观察到红色脂滴出现.qRT?PCR结果显示,与自分化组相比,诱导组的脂肪酶(ADI)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达均明显增加(P<0.001).成骨细胞诱导后,sh?NC?MSC和sh?POSTN?MSC经染色均观察到胞内ALP活性;qRT?PCR结果显示,二者诱导组成骨细胞标志物骨桥蛋白(OPN)表达均显著增加(P<0.001,P<0.01),提示sh?NC?MSC和sh?POSTN?MSC具有成脂、成骨分化能力;同时,与sh?NC?MSC成骨诱导组相比,sh?POSTN?MSC成骨诱导组的胞内ALP活性明显降低,OPN和ALP的mRNA相对表达均显著降低(P<0.001).结论 敲低POSTN基因的hUC?MSC成骨诱导分化能力降低,POSTN参
作者:于丰实;刘伟江;白海涛;袁福临;刘元林;李雪;王洋;张毅
来源:军事医学 2022 年 46卷 4期