构建含一氧化氮合酶(iNOS)基因的重组逆转录病毒pLNCX/iNOS质粒.方法用PCR技术从pCMV/iNOS质粒中扩增出iNOS全长DNA,用限制性内切酶Hind Ⅲ和Cla Ⅰ对iNOSDNA和逆转录病毒质粒pLNCX分别进行双酶切.在T4连接酶的作用下,构建重组逆转录病毒质粒pLNCX/iNOS;用脂质体介导的方法把重组质粒DNA转染进入包装细胞PA317中,经过G418筛选出抗性克隆.通过NIH3T3细胞测定病毒液的病毒滴度.结果经过酶切分析证实PCR扩增的iNOSDNA基因序列与鼠源性iNOS基因序列完全一致.重组质粒经酶切分析与预期的结果一致.G418筛选出16个抗性克隆,能稳定合成并分泌重组逆转录病毒颗粒.NIH3T3细胞测定病毒滴度为2.1×104CFU/ml.结论逆转录病毒载体pLNCX可有效地介导iNOS的转染.
作者：朱梁军；潘英；陈宝安
来源：江苏医药 2002 年 28卷 1期
