目的：构建人的过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARγ）基因的重组腺病毒载体。方法从人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中提取并扩增人 PPARγ cDNA 目的片段，将该目的片段经 AgeⅠ／NheⅠ酶切后插入经相同内切酶酶切后表达质粒（CMV-MCS-SV40-EGFP）得到重组穿梭质粒；再将该重组穿梭质粒与 AdMax 腺病毒包装系统的骨架质粒（pBHG loxΔE1，3 Cre）经 Cre／loxP 酶切重组，构建重组腺病毒（Ad-PPARγ）；最后，将 Ad-PPARγ感染HEK293T 细胞，进行病毒的包装、扩增、纯化及滴度检测。结果通过 PCR 鉴定及基因测序分析，PPARγ过表达重组腺病毒载体构建成功；Western blot 结果显示经包装及纯化的 Ad-PPARγ感染 HUVECs 后，可显著上调 HU-VECs 中 PPARγ基因的表达。结论 PPARγ过表达重组腺病毒载体构建成功，且能有效上调 HUVECs 中PPARγ基因的表达。
作者：李腾；李琼；严国强；储佳佳；沈小丹；温见炳；黄起壬；钟荣梅
来源：南昌大学学报（医学版） 2015 年 3期
