背景:大肠癌的发病率呈明显上升趋势.以往的治疗主要为手术治疗、化学治疗和放射治疗.目前基因疗法已应用于大肠癌治疗的临床实践中.目的:构建复制缺陷型重组hp27mt基因腺病毒并检测其在SW480细胞中的表达,探讨腺病毒载体用于基因治疗的可行性及突变p27的抗肿瘤特性.设计:非随机对照实验.单位:郧阳医学院附属人民医院消化内科,郧阳医学院临床医学研究所,武汉大学中南医院消化内科.材料:实验于2002-01/2003-09在郧阳医学院临床医学研究所完成.AgeⅠ,NheⅠ,KpnⅠ,PacⅠ和PmeⅠ等限制性内切酶;Tag酶,¨DNA连接酶;Western blot检测试剂盒;鼠抗人p27kip1多抗,辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG单抗;pORF9-hp27mt质粒,腺病毒骨架质粒pAdeasy-1,穿梭质粒pShuttle-CMV,LacZ重组腺病毒,脂质体,结肠癌细胞株SW480.方法:①hp27mt自载体pORF9-hp27mt中切出,经2次亚克隆,插入到穿梭质粒pShuttle-CMV中,形成转移质粒pShuttle-CMV-hp27mt;然后再用PmeI线性化的pShuttle-CMV-hp27mt转化含腺病毒骨架质粒pAdeasy-1的超感受态BJ5183,使其在细菌内发生同源重组.重组质粒鉴定正确后经PacI酶切,转入Ad293细胞,包装成重组腺病毒Ad-hp27mt.采用聚合酶链反应方法对重组腺病毒进行鉴定,用紫外分光光度计进行滴度测定.②用重组p27mt的

作者：陈珺；徐少勇；熊玲；邓长生；王家宁；黄永章

来源：中国临床康复 2005 年 9卷 22期