目的构建一个高效的重组腺病毒载体Ad/CMV-hTGFβ1,用于进一步的基因转移逆转椎间盘退变的实验研究.方法应用一种新的重组腺病毒构建系统来构建腺病毒载体.首先将hTGFβ1的cD-NA亚克隆到穿梭质粒pShuttle-CMV上.重组穿梭质粒pShuttle-CMV-hTGFβ经PmeI酶切线性化后,与超螺旋的病毒质粒pAdEasy-1共转染大肠杆菌BJ5183.两种质粒在BJ5183中进行同源重组,重组病毒质粒pAd/CMV-hTGFβ1经卡那霉素平板筛选获得.经酶切分析鉴定后,重组病毒质粒用PacI酶切线化.线化的病毒质粒经脂质体转染293细胞(包装细胞系),于2周内收集重组病毒.结果重组腺病毒质粒经BamHI,PacI酶切鉴定,在0.8
作者：谭江威；胡有谷；郑洪军；李书忠
来源：中国骨肿瘤骨病 2003 年 2卷 2期
