目的 构建携带尾侧型同源转录因子2(caudal-related homeobox transcription factor 2,CDX2)的大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs),为大鼠溃疡性结肠炎模型的基因治疗提供工具.方法 根据GenBank信息,设计CDX2引物,采用PCR扩增CDX2基因片段;通过In-Fusion技术将目的基因片段连接到线性质粒载体中,然后转化感受态细胞,进行阳性克隆筛选及基因测序.将重组载体转染293T细胞,进行慢病毒包装、浓缩及滴度测定.体外分离并培养Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞仪(fluorescence activated cell sorting,FACS)检测细胞免疫表型.将携带CDX2基因的慢病毒载体转染至大鼠骨髓间充质干细胞,利用RT-PCR及Western blot等技术检测CDX2基因及蛋白的表达水平.结果 PCR、DNA测序及Western blot检测成功构建重组Ubi-CDX2-MCS-3FLAG-CMV-EGFP GV365慢病毒载体,测定滴度为2×108 TU/ml;成功完成大鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养,FACS结果 显示,大鼠BMSCs表达CD29、CD73、CD90和CD105,而不表达CD34和CD45,符合骨髓间充质干细胞的表型.成功构建携带CDX2基因的BMSCs,RT-PCR及Western blot结果 显示CDX2基因转染至大鼠BMSCs并能稳定表达.结论 本研究成功构建了携带CDX2基因的大鼠BMSCs并稳定表达CDX2,为溃

作者：汪晓；孙涛

来源：解放军医学院学报 2017 年 38卷 3期