目的：扩增金黄色葡萄球菌肠毒素 B（SEB）基因，构建其原核表达载体，并进行诱导、表达，为其应用研究奠定基础。方法根据 GenBank 中 SEB 的基因序列，设计一对分别含 BamH Ⅰ、Xho Ⅰ酶切位点的特异性引物，以金黄色葡萄球菌基因组DNA 为模板进行 PCR 扩增后，经 BamH Ⅰ、Xho Ⅰ双酶切，并与做相应酶切的 pET‐28α（＋）连接，转化大肠杆菌 BL21，提取质粒进行双酶切鉴定及测序，用 IPTG 诱导表达融合蛋白，SDS‐PAGE 和 Western blot 印迹鉴定表达产物。结果成功扩增出 SEB 基因，基因大小为801 bp ，重组 PET‐28α（＋）‐SEB 双酶切鉴定可见目的片段，测序结果显示 SEB 在正确读框中，序列比对分析显示其与相关报道核苷酸序列一致性达99％。经 IPTG 诱导后，pET‐28α（＋）‐SEB／BL21在相应的相对分子质量（35×103）可见融合蛋白以包涵体形式表达，免疫印迹在相应分子量检测到目的蛋白。结论克隆了 SEB 基因，并成功在大肠杆菌 BL21中以包涵体形式表达，为肠毒素 B 应用研究奠定了基础。
作者：李飞；周帅；董慧；黄艳梅；梁秉绍；李娟；龙燕；王洁琳；谢永强；杨镒宇；周珍文
来源：检验医学与临床 2016 年 13卷 18期
