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目的:探讨在脓毒症状态下白细胞介素(IL)-37对调节性T细胞(Treg)免疫功能影响。方法:分离纯化C57BL/6J小鼠脾脏Treg,进行体外培养,并将细胞分为健康对照组,脂多糖(LPS)组、IL-37组、LPS+IL-37组、LPS+3-Methyladenine (3-MA)组、LPS+3-MA+IL-37组、LPS+雷帕霉素(rapamycin)组、LPS+雷帕霉素+IL-37组。细胞培养24 h、48 h及72 h后,分别收集培养上清液及细胞,通过ELISA法检测Treg中IL-10和TGF-β分泌情况,采用流式细胞仪检测叉头翼状转录因子(Foxp3)和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4 (CTLA-4)的表达;并应用透射电子显微镜观察细胞自噬小体的形成及数目,Western blot检测自噬相关蛋白LC3I/Ⅱ以及Beclin1表达。此外,采用盲肠结扎穿孔术构建小鼠脓毒症模型,记录并比较各组小鼠生存率差异。结果:在LPS刺激Treg 24 h、48 h及72 h后分别给予IL-37处理,观察到LPS与IL-37协同刺激72 h后Treg功能明显增强;分别予以LPS和IL-37刺激Treg细胞后,透射电镜下观察自噬小体的形成明显增多。分别用自噬激动剂雷帕霉素和自噬抑制剂3-MA预处理改变细胞自噬活性,发现3-MA处理组和对照组相比,Treg功能显著下降,雷帕霉素处理组Treg功能则出现增强。3-MA处理组上清液中TGF-β分泌水平明显下降,雷帕

作者:王雪松;李婉丽;王大伟;寿松涛;姚咏明

来源:中华急诊医学杂志 2020 年 29卷 2期

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作者:
王雪松;李婉丽;王大伟;寿松涛;姚咏明
来源:
中华急诊医学杂志 2020 年 29卷 2期
标签:
白细胞介素37 脓毒症 调节性T细胞 细胞自噬 Interleukin 37 Sepsis Regulatory T cell Autophagy
目的:探讨在脓毒症状态下白细胞介素(IL)-37对调节性T细胞(Treg)免疫功能影响。方法:分离纯化C57BL/6J小鼠脾脏Treg,进行体外培养,并将细胞分为健康对照组,脂多糖(LPS)组、IL-37组、LPS+IL-37组、LPS+3-Methyladenine (3-MA)组、LPS+3-MA+IL-37组、LPS+雷帕霉素(rapamycin)组、LPS+雷帕霉素+IL-37组。细胞培养24 h、48 h及72 h后,分别收集培养上清液及细胞,通过ELISA法检测Treg中IL-10和TGF-β分泌情况,采用流式细胞仪检测叉头翼状转录因子(Foxp3)和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4 (CTLA-4)的表达;并应用透射电子显微镜观察细胞自噬小体的形成及数目,Western blot检测自噬相关蛋白LC3I/Ⅱ以及Beclin1表达。此外,采用盲肠结扎穿孔术构建小鼠脓毒症模型,记录并比较各组小鼠生存率差异。结果:在LPS刺激Treg 24 h、48 h及72 h后分别给予IL-37处理,观察到LPS与IL-37协同刺激72 h后Treg功能明显增强;分别予以LPS和IL-37刺激Treg细胞后,透射电镜下观察自噬小体的形成明显增多。分别用自噬激动剂雷帕霉素和自噬抑制剂3-MA预处理改变细胞自噬活性,发现3-MA处理组和对照组相比,Treg功能显著下降,雷帕霉素处理组Treg功能则出现增强。3-MA处理组上清液中TGF-β分泌水平明显下降,雷帕