[目的]克隆柞蚕Antheraea pernyi海藻糖酶 (trehalase, Treh) 基因, 探讨该基因在柞蚕蛹滞育和滞育解除过程中的表达模式与海藻糖酶活力变化, 为阐明柞蚕蛹滞育期间糖代谢机制提供参考.[方法]利用RT-PCR技术从柞蚕蛹中克隆获得海藻糖酶基因, 并对其进行生物信息学分析.采用半定量RT-PCR检测长光照 (17L∶7D) 处理后的滞育解除柞蚕蛹与对照滞育蛹不同组织中该基因的表达谱;采用实时定量PCR (qPCR) 分析其在长光照下滞育解除过程中柞蚕蛹脂肪体中的相对表达量变化.利用3, 5-二硝基水杨酸法检测脂肪体中海藻糖酶活力的变化, 同时采用蒽酮比色法测定其血淋巴中海藻糖含量.[结果]克隆获得柞蚕3个海藻糖酶基因, 分别命名为ApTreh1A, ApTreh1B和ApTreh2 (GenBank登录号分别为:KU977455, KU977456和KU977457), 开放阅读框 (ORF) 全长分别为1 797, 1 635和1 932 bp, 分别编码598, 544和643个氨基酸.同源序列比对与系统进化树分析表明, ApTreh1A和ApTreh1B为可溶型海藻糖酶 (Treh S), ApTreh2为膜结合型海藻糖酶 (Treh M).半定量RT-PCR检测发现, 各组织中ApTreh2比ApTreh1的分布更广且表达量更高.qPCR检测发现, ApTreh1A和ApTreh1B在长光照处理后的柞蚕蛹脂肪体中, 21 d时表达量都表现出快速升高[分别是对照组 (12L

作者：王德意；汝玉涛；王勇；马月月；那爽；孙良振；姜义仁；秦利

来源：昆虫学报 2018 年 61卷 7期