【目的】细胞色素 P450是分布极其广泛的超家族酶,在昆虫内源及外源化合物代谢中发挥着重要的作用。本文分析了飞蝗 Locusta migratoria CYP408B1和 CYP409A1基因在不同组织部位的表达差异,并对两种蛋白进行原核表达,为其分子特性和生物学功能的深入研究提供基础资料。【方法】提取飞蝗5龄若虫不同组织部位的总 RNA,体外反转录成 cDNA,采用 Real-time PCR 和 RT-PCR 技术分析飞蝗CYP408B1和 CYP409A1在不同组织部位的表达模式,构建表达载体 pCW/CYP408B1、pCW/CYP409A1和 pAC/CPR,将 pCW/CYP408B1和 pCW/CYP409A1分别与 pAC/CPR 在大肠杆菌 Escherichia coli BL21(DE3)中进行共表达。【结果】通过 PCR 检测,发现 CYP408B1和 CYP409A1在飞蝗5 龄若虫触角、脑、视叶、咽下神经节、胸神经节和附腺中均有表达,其中 CYP408B1在附腺中表达量较高。原核表达结果显示,CYP409A1和 CPR(NADPH 细胞色素 P450还原酶)均可表达,蛋白分子量分别约为58 ku 和77 ku,但均为包涵体,而 CYP408B1未能成功表达。【结论】本文揭示了飞蝗 CYP408B1和 CYP409A1在不同组织部位的表达模式,并对 CYP409A1和 CPR 进行了原核表达,研究结果为深入探讨飞蝗细胞色素 P450基因对杀虫剂的代谢解毒作用提供了实验依据和基
作者:高翠娥;任晓宇;张学尧;张婷婷;张建珍;马恩波;吴海花
来源:应用昆虫学报 2015 年 1期