目的 克隆人Bcl-xL基因全长编码区,并利用载体pet28a在大肠埃希菌(ROS)原核表达人Bcl-xL蛋白,为探讨Bcl-xL与肿瘤的关系奠定基础.方法 分离胃癌患者外周血单核细胞并提取总RNA;采用RT-PCR方法扩增Bel-xL基因,构建重组表达质粒pet28a/Bcl-xL；酶切鉴定挑选阳性重组质粒转化大肠埃希菌ROS,测序鉴定后增菌培养,IPTG 25℃诱导6h,SDS-PAGE电泳判断以包涵体形式存在的带有His标签的融合蛋白,进一步利用免疫印迹法鉴定.结果 成功扩增获得Bcl-xL基因CDS区全长702 bp,与GenBank中发表的序列完全一致；成功构建了原核表达载体pet28a/Bcl-xL,并在工程菌ROS中获得大量表达.结论 扩增获得人Bcl-xL基因,并成功原核表达获得人Bcl-xL融合蛋白,为进一步深入研究其生物学功能奠定了基础.
作者：时振华；赵健；吴伟伟；杜鸿
来源：临床输血与检验 2013 年 15卷 4期
