旨在克隆绵羊Spesp1 cDNA并表达,得到纯化的GST-SPESP1融合蛋白.以绵羊睾丸组织总cDNA为模板,根据GenBank公布的绵羊基因组序列设计引物,PCR扩增得到Spesp1 cDNA,构建原核表达重组载体pGEX-Spesp1,将其转化到E.coliBL21中表达,并优化其表达条件,利用SDS-PAGE切胶纯化法得到纯化的融合蛋白,用Western blot鉴定所得融合蛋白.结果表明,经测序,克隆得到的Spesp1 cDNA序列与GenBank中预测的cDNA序列对比有两个碱基不同,并造成一个氨基酸的差异.在E.coliBL21中成功表达重组融合蛋白,其最优表达条件为:37℃、4h、0.005％ IPTG终浓度,SDS-PAGE和Western blotting中,融合蛋白位于约64 kD处并可以被抗GST和抗羊SPESP1的抗体识别,与预计相符,表明融合蛋白成功表达.成功纯化得到GST-SPESP1融合蛋白,为研究SPESP1在精卵细胞膜融合中的功能奠定了基础.
作者：马媛媛；程飞跃；邢万金
来源：生物技术通报 2015 年 31卷 7期
