目的 利用流式细胞术(FCM)协助筛选、纯化RNA干扰(RNAi)效率高的人缺氧诱导因子1-α(HIF-1α)基因沉默肝癌细胞株.方法 选择带Neor及GFP基因的质粒pGenesil-1.1构建HIF-1α靶向小干扰RNA(siRNA)重组表达载体,转染人肝癌细胞株SMMC7721.首先用G418筛选,然后用FCM检测出常氧、缺氧条件下HIF-1α蛋白表达抑制效率最高的转基因细胞株.根据FCM可分选GFP阳性细胞这一特点,进一步用流式细胞分选仪分选纯化转基因细胞,最后用PCR和免疫组化方法鉴定纯化细胞株的HIF-1α干扰效率.结果 单用G418筛选HIF-1α干扰组细胞最高筛选效率为32.9
作者：王燕；李志伟；楚青；江萍；危群；陆晓青
来源：昆明医学院学报 2011 年 32卷 4期
