目的 构建重组质粒pBudCE4.1 -细胞色素P450 3A4( CYP3A4) -谷胱甘肽S转移酶A1(GSTA1),使CYP3 A4和GSTA1可在真核细胞C3A中表达,并且增加其表达量.方法 从含有GSTA1和CYP3A4的开放阅读框(ORF)克隆中扩增GSTA1和CYP3A4基因;将片段GSTA1以及载体pBuDCE4.1双酶切后连接并转化,质粒命名为pBuDCE4.1 - GSTA1;将片段CYP3A4以及质粒pBuDCE4.1 - GSTA1双酶切后连接并转化,所得重组质粒命名为pBudCE4.1 - CYP3A4 - GSTA1;测序验证重组克隆中目的基因片段的序列信息;构建稳定细胞系,测定CYP3 A4活性及GSTA1的表达情况.结果 酶切及测序验证双表达重组质粒pBudCE4.1 - CYP3A4 - GSTA1构建成功,CYP3A4及GSTA1在转染细胞系中的表达量增多.结论 构建成的双表达重组质粒pBudCE4.1 - CYP3A4 - GSTA1符合应用要求.
作者：常彬霞；游绍莉；李保森；貌盼勇；辛绍杰
来源：临床肝胆病杂志 2012 年 28卷 9期
