目的 优化信号转导和转录活化因子5(signal transducers and activators of transcription,STAT 5)诱骗寡核苷酸(decoyoligodeoxynucleotide,decoy ODNs)技术的实验条件,为阻断K562细胞STAT 5信号转导途径,进而诱导细胞表型转变奠定基础.方法 设计并合成STAT 5 decoy ODNs、FAM荧光标记的decoy ODNs和decoy ODNs突变型(M-decoy ODNs);SDS-PAGE检测不同退火缓冲液条件下decoy ODNs双链形成率;倒置荧光显微镜下通过阳性细胞计数比较DEAE、lipofectin和DMRIE-C 3种转染试剂对decoy ODNs的转染效率;流式细胞仪(FCM)检测转染12、24和72 h时FAM-decoy ODNs摄取率和荧光强度,检测decoy ODNs的稳定性;MTT实验检测decoy ODNs对K562细胞活力的影响;RT-PCR检测decoy ODNs对pim-1和c-myc基因表达的影响.结果 退火缓冲液(10 mmol/L Tris,pH 8.0,50 mmol/L NaCl,1 mmol/L EDTA)更有利于decoy ODNs双链形成.DMRIE-C的转染效率(99.2±4.6)
作者：曾建明；冯文莉；王小中；史梅；陈敏；刘兴；涂植光；黄宗干
来源：临床检验杂志 2006 年 24卷 5期
