目的:初步探讨雷帕霉素在不同浓度和不同孵育时间下,对人角质形成细胞系HaCaT细胞自噬的诱导效应及其分子机制.方法:不同浓度雷帕霉素处理HaCaT细胞4h或12h后,利用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测雷帕霉素对细胞活力的影响,并提取蛋白进行蛋白印迹实验,检测LC3-Ⅱ表达水平,作为自噬的检测方法;通过透射电镜分析自噬体形成,确认雷帕霉素对自噬的诱导效果.检测自噬调控上游关键元件哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白表达及其ser2481和ser2448磷酸化产物水平,分析mTOR活性;并分析自噬调控下游的另一关键基因Atg7的表达,初步分析雷帕霉素诱导HaCaT细胞的分子机制.结果:不同浓度雷帕霉素处理4h,对HaCaT细胞的活力没有显著的影响.高剂量雷帕霉素(80 nmol/L和100 nmol/L)在处理12h后对HaCaT细胞的活力产生毒性效应.20 nmol/L和50 nmol/L雷帕霉素孵育4h诱导HaCaT细胞LC3-Ⅱ表达上调,而20 nmol/L和50 nmol/L雷帕霉素孵育12h仍具有诱导效应.相较于其他浓度,在50 nmol/L雷帕霉素孵育诱导的LC3-Ⅱ表达上调效应最为显著,并且在药物孵育4h时超微结构水平诱导产生胞质内大量自噬体形成.1～50 nmol/L浓度的雷帕霉素孵育4h或12h均可诱导HaCaT细胞mTOR ser2481和mTOR ser44s磷酸化产物水平降低;然而Atg7表达不能观测到显著的差
作者：陈旭；徐松；黄丹；鞠梅；陈崑；李新宇；顾恒
来源：临床皮肤科杂志 2014 年 43卷 5期
