目的 探讨外源性p53mut、p53wt和p16基因转染人肺癌细胞株H1299后对其Smad4蛋白表达的影响.方法 运用PCR方法扩增p53mut、p53wt"及p16基因,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-p53mut、pIRES2-EGFP-p53wt及pIRES2-EGFP-p16,脂质体法单独或共转染H1299细胞.荧光显微镜下观察细胞中表达的带绿色荧光的增强型荧光蛋白(EGFP),使用RT-PCR验证质粒载体转染效果,使用Western blot检测转染后各组细胞Smad4蛋白表达水平的变化.结果 转染72小时后在荧光显微镜下观察到被转染的H1299细胞发绿色荧光.经RT-PCR证实转染后的H1299细胞成功表达目的基因.Western blot法显示空载体组与空白对照组在Smad4蛋白表达上无明显差异(P＞0.05),p53mut组Smad4蛋白表达较空载体组下调(P＜0.05),而p53wt转染组或p53wt、p16联合转染组Smad4表达增强,且以后者的上调作用更为明显(P＜0.05).结论 p53mut转染可抑制H1299细胞的Samd4蛋白表达,而单独转染p16或共转染p16、p53wt可使Smad4蛋白表达上调,且以后者的上调作用更为显著.p53mut的促癌作用及p53wt和p16的抑癌作用可能与TGF-β/Smad4相关信号通路有关.
作者：卞春安；蒋琰华；李忠佑
来源：临床外科杂志 2018 年 26卷 3期
