目的:研究大鼠线粒体融合素基因2(Mfn2)在去除蛋白激酶A(PKA)磷酸化位点后对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及其相关的信号通路.方法:构建携带去除PKA磷酸化位点的Mfn2重组腺病毒[Adv-Mfn2-PKA(△)]和携带Mfn2的重组腺病毒(Adv-Mfn2)并感染VSMC.Western blot分析法Mfn2-PKA(△)和Mfn2蛋白的表达;激光共聚焦显微镜观察其亚细胞定位;荧光显微镜观察细胞形态变化;四甲基偶氮唑盐(MTT)法比较其对细胞增殖的影响;Western blot法分析磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达变化.结果:激光共聚焦显微镜示Mfn2-PKA(△)与Mfn2蛋白都主要分布于线粒体外膜;荧光显微镜示Mfn2组细胞数较少,而Mfn2-PKA(△)组与对照组相似;MTT示,Mfn2-PKA(△)抑制VSMC增殖作用较Mfn2显著减弱(P＜0.01),与对照组无显著差异;Western blot结果显示,Mfn2-PKA(△)较Mfn2组p-ERK1/2表达显著升高(P＜0.01),与对照组无明显差异.结论:Mfn2-PKA(△)与Mfn2蛋白一样都定位于线粒体外膜,但抑制VSMC增殖的作用消失,对ERK1/2信号通路无抑制作用.表明PKA磷酸化位点是调控Mfn2抗VSMC增殖的重要功能位点.
作者：周炜；曹文静；陈莉莉；郭小梅；陈光慧
来源：临床心血管病杂志 2009 年 25卷 10期
