目的 观察COPD患者体内N6-甲基腺苷(m6A)甲基化酶水平,并探讨肥胖相关蛋白(FTO)对细颗粒物2. 5(PM2. 5)刺激后小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S)的极化及核因子κB(NF-κB)信号活化的影响.方法 收集COPD患者的支气管肺泡灌洗液标本.使用m6A dot blot检测两组mRNA的 m6A变化.体外培养 MH-S细胞,使用PM2. 5刺激细胞.构建 FTO的过表达质粒 pcDNA3. 1-FTO(pc-FTO)及空载体 pcDNA3. 1-Null(pc-Null),并转染MH-S细胞.将MH-S细胞分为对照组、PM2. 5组、PM2. 5+pcFTO组、pcFTO组和pcNull组.RT-PCR和ELISA检测人肺泡灌洗液中 m6A甲基化调节酶 METTL3、METTL14、FTO、ALKBH5、YTHDF2的表达;CCK-8检测MH-S细胞的存活率,蛋白免疫印迹检测 MH-S细胞的 FTO、一氧化氮合酶2(iNOS2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、精氨酸酶1(ARG1)、甘露糖受体 C2(MRC2)、NF-κB-p65、磷酸化的(p)-p65、p-IκBα、IκBα的表达.结果 FTO在COPD患者体内表达下调(P <0. 05),METTL3、METTL14、ALKBH5、YTHDF2无变化(P >0. 05);且COPD患者的m6A甲基化增加.不同浓度暴露 PM2. 5抑制 MH-S细胞的存活率和 FTO的表达水平(P<0. 05),对METTL3、METTL14、ALKBH5、YTHDF2的表达影响不明显(P >0. 05).PM2. 5明显促进 MH-S细胞M1型极化特征标志物 iNOS2和 TNF-α
作者:陈丽娜;薛岑;杜丽娟;祝劲
来源:实用药物与临床 2021 年 24卷 7期