目的:通过人生长激素基因(hGH)逆转录病毒表达载体的构建,与体外表达为生长激素缺乏症(GHD)基因治疗的进一步体内研究奠定基础.方法:质粒PNMG3用EcoR I酶切,将约3.9kb的小鼠金属硫蛋白启动子(mMT-1)和人生长激素(hGH)基因片段克隆至逆转录病毒表达载体pLX-SN中,对阳性重组子pLXSNhGH进行酶切鉴定,脂质体转染包装细胞系PA317,G418筛选抗性克隆,扩增单个克隆后提取包装细胞上清的病毒,将病毒感染原代小鼠胚胎成纤维细胞,应用RT-PCR、Southern、Western和ELISA对其转染及表达情况进行鉴定.结果:成功构建了人生长激素基因逆转录病毒表达载体pLXSHhGH,在原代小鼠胚胎成纤维细胞可表达生理水平的hGH.体内活性鉴定证明表达蛋白在动物体内是稳定的.结论:人生长激素基因逆转录病毒表达载体pLXSNhGH的成功构建与体外表达,为细胞移植系统引入GHD基因治疗的研究奠定了基础.
作者：杨富明；刘威；胡志强；童光志；刘恩重
来源：立体定向和功能性神经外科杂志 2001 年 14卷 3期
