目的克隆人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)F基因,构建F基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/F,并进行表达和鉴定.方法根据编码F蛋白的基因序列设计引物,通过RT-PCR从感染HRSV的HEp-2细胞中扩增获得F蛋白的基因,然后克隆到pGEM-3zf载体中,序列测定正确后,将其亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),行酶切鉴定,脂质体法转染COS-7细胞,应用Western blotting方法分析F基因表达情况.结果测序证实得到HRSV F基因序列,序列分析显示没有发生无义突变.转染COS-7细胞后,利用Western blotting方法检测到了F蛋白的特异性条带.结论成功克隆HRSV F基因,并在真核细胞中获得表达.
作者：袁媛；何金生；张梅；宋蔚；李栋梁；虞结梅；杨兵
来源：免疫学杂志 2006 年 22卷 3期
