目的 在原核细胞中表达人癌胚抗原(CEA)的迷你基因短肽,纯化及鉴定目的 蛋白,并检测其在小鼠体内的抗原性.方法 利用PCR技术从人基因组中得到一段来源于CEA的DNA序列,其中包含两个编码分别能被HLA-DR4/9、HLA-DR53以及HLA-DR4/7/9型别的人群所识别辅助性T细胞(HTL)表位的迷你基因,构建重组表达质粒pQE30-CEA625-667,在大肠杆菌M15中诱导表达.Westren Blot杂交鉴定、镍凝胶亲和层析法纯化目的 蛋白.3H-TdR掺入法检测目的 短肽诱导的小鼠淋巴细胞增殖反应.结果 CEA625-667短肽在大肠杆菌M15中以包涵体形式表达.Western-blot结果显示,在相对分子质量约6 700处有表达产物与6×his mAb特异性结合带.镍柱纯化后可得到纯化的目的 蛋白.3H-TdR掺入实验所得不同浓度的CEA625-667与小鼠脾细胞共孵育7～9 d后的刺激指数相继达到对照组的10倍以上.结论 成功诱导了CEA625-667短肽的原核表达,通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的CEA625-667短肽,并证明在一定浓度下目的 短肽可于体外诱导小鼠的特异性淋巴细胞增殖.为CEA625-667迷你基因作为表位疫苗在抗肿瘤方面的进一步研究提供条件.
作者：李丹；方艳秋；谭岩；刘力华；段秀梅；许淑芬
来源：免疫学杂志 2008 年 24卷 4期
