目的 构建人源抗乙型肝炎病毒表面抗原(HBsg)×人源化抗CD3双特异双链抗体(aiabody)与重组复合干扰素(consensus Interferon, cIFN)的融合蛋白(抗HBsAg×抗CD3 diabody-cIFN,简称S×3Db-cIFN)的表达载体,在原核表达系统中进行表达,并鉴定表达蛋白的活性.方法 对相关的模板重组载体进行限制性内切酶消化和T4连接酶的连接,构建目的 重组载体pRA-cIFNSHOL和pRA-OHSL,经测序鉴定后分别转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,用SDS-PAGE和Western blotting进行表达鉴定,用GuHCl阶段透析法重新折叠获得目的 蛋白S×3Db-cIFN.用ELISA和流式细胞术进行S×3Db-cIFN的抗HBsAg抗体活性和抗CD3抗体活性.结果 成功构建了表达载体pRA-cIFNSHOL和pRA-OHSL,并实现了大肠杆菌中的高效表达和表达后的重新折叠,获得了目的 蛋白S×3Db-cIFN,蛋白复性率为24
作者：刘顺爱；郭晶晶；余康康；刘志英；冯鑫；徐道振
来源：免疫学杂志 2008 年 24卷 4期
