目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建稳定敲除高迁移率族蛋白A2（high mobility group protein AT-Hook-2，HMGA2）基因的人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1细胞模型。方法:重组pLV[2gRNA]- EGFP:T2A:Puro- U6>{hHMGA2 [gRNA#A1]*}- U6>{hHMGA2 [gRNA#A2]*}慢病毒质粒载体的构建：设计靶向HMGA2基因的Dual-gRNA序列，将合成的Dual-gRNA片段克隆到pLV [2gRNA]- EGFP：T2A:Puro-U6载体中，提取单克隆进行测序验证。成功构建的重组质粒载体进行慢病毒包装，并感染TPC-1细胞，利用嘌呤霉素进行筛选获得HMGA2敲除的单克隆，进行PCR及测序验证，实时荧光定量qPCR检测细胞中HMGA2 mRNA的敲除效率。结果:经测序验证，成功构建了靶向HMGA2基因的pLV [2gRNA]- EGFP：T2A:Puro-U6>{hHMGA2 [gRNA#A1]*}-U6> {hHMGA2 [gRNA#A2]*}质粒。挑取单克隆进行PCR鉴定及基因测序，成功获得了HMGA2完全敲除的TPC-1细胞。经实时荧光定量qPCR检测HMGA2敲除的TPC-1细胞，未表达HMGA2 mRNA。结论:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术能成功构建稳定敲除HMGA2基因的人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1细胞模型。
作者：勇宏；李小娟；金山；刘友胜；乌云图；白银宝；塔拉
来源：中华内分泌外科杂志 2022 年 16卷 4期
