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目的 采用人SCN1A基因非保守区DNA构建短发夹RNA(shRNA)稳定表达的重组质粒,在HEK293细胞中抑制SCN1A基因表达.方法 PCR分别正反向扩增SCN1A基因特异序列,构建成一个绿色光蛋白(GFP)与发夹结构RNA(shRNA)融合表达的重组质粒pEGFP-SCN1A-shRNA;该质粒和对照质粒(pCMV-EGFP)分别与SCN1A基因表达质粒(pCMV-SCN1A)共转染HEK293细胞株,采用半定量RT-PCR及双荧光共定位法鉴定SCN1A基因的表达情况.结果 与对照相比较,shRNA表达质粒转染的培养细胞中SCN1A基因mRNA表达量下调90

作者:龙跃生;孙卫文;赵绮华;曾涛;廖卫平

来源:南华大学学报(医学版) 2009 年 37卷 3期

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龙跃生;孙卫文;赵绮华;曾涛;廖卫平
来源:
南华大学学报(医学版) 2009 年 37卷 3期
标签:
RNA干扰 钠通道 癫痫
目的 采用人SCN1A基因非保守区DNA构建短发夹RNA(shRNA)稳定表达的重组质粒,在HEK293细胞中抑制SCN1A基因表达.方法 PCR分别正反向扩增SCN1A基因特异序列,构建成一个绿色光蛋白(GFP)与发夹结构RNA(shRNA)融合表达的重组质粒pEGFP-SCN1A-shRNA;该质粒和对照质粒(pCMV-EGFP)分别与SCN1A基因表达质粒(pCMV-SCN1A)共转染HEK293细胞株,采用半定量RT-PCR及双荧光共定位法鉴定SCN1A基因的表达情况.结果 与对照相比较,shRNA表达质粒转染的培养细胞中SCN1A基因mRNA表达量下调90