目的 研究衰老表型的肝细胞外泌体对脂多糖(LPS)刺激软骨细胞的影响及白芍的干预效应.方法 提取小鼠肝原代细胞,CCK-8法筛选白芍水煎液干预肝细胞的最佳浓度.随后,肝细胞随机分为空白组、衰老组和白芍组,0.3 mmol·L-1过氧化氢诱导肝细胞衰老,检测肝细胞p16、p21、p53的基因和蛋白表达,观察肝细胞衰老及白芍的干预效应.分别提取各组肝细胞上清中的外泌体,通过电镜、粒径分析、四旋蛋白CD9、CD63、CD81鉴定外泌体.培养小鼠软骨细胞,LPS刺激以模拟KOA炎症环境,检测细胞上清液中TNF-α和IL-1β含量以验证造模成功.PHK67染色标记肝细胞外泌体并观察软骨细胞的摄入情况.将收集的各组肝细胞外泌体用于干预LPS致炎软骨细胞,检测软骨细胞基质降解合成标记物MMP3、MMP13、SOX9、ADAMTS5的基因和蛋白表达水平.结果 经CCK-8法筛选,100 μg·mL-1为白芍水煎液干预肝细胞的最佳浓度.过氧化氢干预后,衰老组中细胞衰老标记物p16、p21、p53的基因和蛋白表达均高于正常组(P＜0.05),而在白芍组则较衰老组降低(P＜0.05).各组肝细胞所收集外泌体均呈现双层膜结构,形态大小无差异,粒径富集均满足40～120 nm区间,代表性粒径富集于116.8 nm,丰度98％,外泌体标记物四旋蛋白CD9、CD63、CD81均为阳性表达.软骨细胞上清液中,促炎因子
作者：张力；李晓辰；廖太阳；王培民；邢润麟
来源：南京中医药大学学报 2021 年 37卷 5期
