目的 在胃癌细胞中筛选并鉴定靶向Sirt1基因的micorRNA.方法 生物信息学软件预测特异性靶向Sirt1基因3’端非编码区域(3′-UTR)的microRNA;分别构建野生型和突变型与目的microRNA匹配的Sirt1基因3′-UTR序列双荧光素酶报告基因载体;将miR-138-5p过表达质粒分别与野生型和突变型双荧光素酶报告基因载体共转染入胃癌细胞株BGC-823中,应用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性.miR-138-5p过表达质粒转染BGC-823细胞,荧光定量PCR检测转染细胞miR-138-5p与Sirt1 mRNA的表达,Westemblot检测SIRT1蛋白的表达.结果 生物信息学软件预测显示miR-138-5p为靶向调控Sirt1的候选microR-NA;成功构建野生型和突变型Sirt1基因3′-UTR双荧光素酶报告基因载体;荧光素酶活性实验表明,miR-138-5p可以下调野生型质粒的荧光素酶活性,不影响突变型质粒的荧光素酶.miR-138-5p过表达质粒转染后的BGC-823细胞中,miR-138-5p表达显著上调,Sirt1基因mRNA和蛋白的表达水平明显下调.结论 在胃癌细胞中miR-138-5p靶向作用于Sirt1基因3′-UTR,并负性调控Sirt1基因.
作者：杨伟；张娜；金丽娟；摆茹；韩梅
来源：宁夏医科大学学报 2016 年 38卷 9期
