目的:利用pAdEasy-1腺病毒载体系统构建人HBx基因重组腺病毒,感染肝癌细胞株SMMC-7721使HBx基因有效表达.方法:自真核表达载体pcDNA3.1(-)-HBx中获得HBx基因,插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中构建pAdTrack-CMV-HBx,然后经PmeⅠ酶切线性化,电转化到含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183感受态细菌中.挑选和鉴定正确的同源重组质粒,然后将线性化的重组质粒转染293N细胞,产生重组病毒颗粒,并进一步感染SMMC-7721细胞株.结果:经限制性内切酶酶切和基因测序鉴定,证实pAdTrack-CMV-pAdEasy-1-HBx重组成功,借助荧光显微镜可以观察到绿色荧光蛋白GFP在293N和SMMC-7721细胞株中表达.结论:成功构建了携带HBx基因的重组腺病毒载体,并在SMMC-7721细胞中使HBx基因有效表达,为后续研究奠定了基础.
作者：杨世忠；李晓武；刘志君；张雷达；董家鸿
来源：中华肿瘤防治杂志 2006 年 13卷 1期
