目的:构建针对人BRMS1基因的RNA干扰表达载体并检测其有效性,为后续研究提供基础.方法:设计合成针对人BRMS1的特异性siRNA前体寡核苷酸,依次通过退火,连接,构建含前体siRNA的重组质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-BRMS1-si-RNA.经测序鉴定后,通过脂质体介导将其与pDsRed2-N1-BRMS1质粒(包含BRMS1红色荧光融合蛋白的载体)共转染人胚肾293细胞.分别用倒置荧光显微镜和流式细胞术观察转染细胞中红色荧光蛋白的强度,检测干扰效果.结果:确定了两时针对人BRMS1的siRNA片段.经测序鉴定,两种含前体siRNA的质粒均构建成功.共转染后,倒置荧光显微镜下观察可见,两种siRNA均能明显降低细胞中BRMS1的表达;用流式细胞仪检测证实,siRNA1及siRNA2分别使BRMS1表达下降67.33
作者：杨银龙；王福宾；张强鸽；翟羽；邵志敏
来源：中华肿瘤防治杂志 2010 年 17卷 6期
