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目的:探讨模拟低氧环境对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及低氧诱导因子(HIF-1α)、基质衍生因子-1(SDF-1)和趋化因子受体4 (CXCR4)表达的影响.方法:常规复苏、传代培养MCF-7细胞,待细胞对数期生长后分别用50、100、150和200 μmol/L CoCl2处理细胞,并于12、24和48 h收集细胞进行以下指标检测.MTT比色法检测细胞增殖抑制率;RT-PCR检测HIF-1α、SDF-1和CXCR4的mRNA表达;蛋白质印迹法检测HIF-1α和CXCR4在蛋白水平的表达;免疫荧光法测定150 μmol/L CoCl2经不同时间处理后MCF-7细胞中SDF-1的表达.结果:低氧模拟微环境中,应用CoCl2处理MCF-7细胞后有较明显抑制作用,实验中以CoCl2(50、100、150和200 μmol/L)处理MCF-7细胞24 h后抑制率分别为(54.62±0.07)%、(65.21±0.03)%、(80.15±0.01)%和(94.51±0.01)%;以CoCl2 150 μmol/L浓度处理细胞12、24和48 h后,抑制率分别为(70.83±0.03)%、(80.15±0.01)%和(89.27±0.03)%;RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果表明,HIF-1α、SDF-1和CXCR4的mRNA的表达及HIF-1α和CXCR4蛋白的表达与低氧时间和CoCl2浓度有关,以低氧处理细胞24 h及CoCl2浓度150μmol/L时最明显;免疫荧光结果表明CoCl2 150 μmol/L时MCF-7细胞SDF-1蛋白的表达随时间延长有增加.结论:CoCl2模拟低氧

作者:刘红光;刘登辉;康颖;蒋静;佘键涛;文波;赵茂勋;王雄宇

来源:中华肿瘤防治杂志 2013 年 20卷 12期

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作者:
刘红光;刘登辉;康颖;蒋静;佘键涛;文波;赵茂勋;王雄宇
来源:
中华肿瘤防治杂志 2013 年 20卷 12期
标签:
乳腺肿瘤 低氧诱导因子 基质衍生因子-1 趋化因子受体4 二氯化钴
目的:探讨模拟低氧环境对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及低氧诱导因子(HIF-1α)、基质衍生因子-1(SDF-1)和趋化因子受体4 (CXCR4)表达的影响.方法:常规复苏、传代培养MCF-7细胞,待细胞对数期生长后分别用50、100、150和200 μmol/L CoCl2处理细胞,并于12、24和48 h收集细胞进行以下指标检测.MTT比色法检测细胞增殖抑制率;RT-PCR检测HIF-1α、SDF-1和CXCR4的mRNA表达;蛋白质印迹法检测HIF-1α和CXCR4在蛋白水平的表达;免疫荧光法测定150 μmol/L CoCl2经不同时间处理后MCF-7细胞中SDF-1的表达.结果:低氧模拟微环境中,应用CoCl2处理MCF-7细胞后有较明显抑制作用,实验中以CoCl2(50、100、150和200 μmol/L)处理MCF-7细胞24 h后抑制率分别为(54.62±0.07)%、(65.21±0.03)%、(80.15±0.01)%和(94.51±0.01)%;以CoCl2 150 μmol/L浓度处理细胞12、24和48 h后,抑制率分别为(70.83±0.03)%、(80.15±0.01)%和(89.27±0.03)%;RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果表明,HIF-1α、SDF-1和CXCR4的mRNA的表达及HIF-1α和CXCR4蛋白的表达与低氧时间和CoCl2浓度有关,以低氧处理细胞24 h及CoCl2浓度150μmol/L时最明显;免疫荧光结果表明CoCl2 150 μmol/L时MCF-7细胞SDF-1蛋白的表达随时间延长有增加.结论:CoCl2模拟低氧