目的:构建针对人γ-synuclein基因的shRNA真核表达载体,观察γ-synuclein基因对人结肠癌细胞系体外生物学行为的影响.方法:根据人γ-synuclein序列设计并构建γ-synuclein基因的shRNA真核表达载体,以脂质体转染的方法将γ-synuclein干扰质粒转染至人结肠癌细胞株HCT116,经G418筛选出稳定转染的细胞株.应用CCK8法检测γ-synuclein干扰对HCT116细胞增殖的影响,软琼脂克隆形成实验检测细胞体外克隆形成能力,细胞划痕实验检测细胞体外迁移能力,Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力.结果:经测序证明γ-synuclein的shRNA序列已成功插入pGCsi-U6/neo/GFP质粒中,构建的干扰质粒能够显著抑制γ-synuclein mRNA及蛋白的表达.γ-synuclein受抑制后,HCT116细胞增殖数目从48 h后开始减少,持续72 h,与空质粒组及未转染组相比,差异均有统计学意义,P＜0.05.siRNA组细胞克隆形成率为(9.6±2.9)％,显著低于未转染组的(29.4±4.5)％和空质粒组的(32.1±5.8)％,差异均具有统计学意义,P＜0.05.在细胞划痕实验中,γ-synuclein被抑制后细胞划痕损伤愈合的速度明显减慢.在侵袭实验中,穿过Matrigel胶及Transwell小室膜的siRNA组侵袭细胞数为20.1±5.26,显著低于未转染组的100和空质粒组的105.4±12.5,差异均有统计学意义,P＜0.05.

作者：叶青；黄峰；龚福生；许杨梅；王晓盈；黄丽洁；应敏刚

来源：中华肿瘤防治杂志 2013 年 20卷 14期