目的:探讨小干扰RNA(siRNA)介导的核糖核苷酸小亚基M2 (ribonucleotide reductase M2,RRM2)沉默对顺铂(DDP)诱导的卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP敏感性的影响.方法:采用间歇浓度梯度递增法诱导SKOV3/DDP;将RRM2基因的特异性siRNA转染SKOV3/DDP细胞,另设空白组和SKOV3/DDP-RRM2-neg(阴性组)做为对照;荧光PCR技术和蛋白质印迹法分别检测转染后备组细胞中RRM2基因mRNA和蛋白表达;MTT法检测RNAi对SK-OV3/DDP细胞药物敏感性的影响.结果:成功诱导出卵巢癌DDP耐药细胞株SKOV3/DDP细胞,其耐药系数达到3.6,属低度耐药,但对吉西他滨(Gem)仍敏感.DDP对干扰组、阴性组和空白组细胞48 h的IC50分别为(3.09±0.11)、(9.88±0.37)和(10.35±0.03) μg/mL,3者间差异有统计学意义,P＜0.001.干扰组细胞对DDP的敏感度提高了约3倍,其RF为3.3.SKOV3/DDP-RRM2-RNAi 667(Ⅰ)组RRM2 mRNA水平下调为74.1％,P=0.010;SKOV3/DDP-RRM2-RNAi480(Ⅱ)组RRM2 mRNA水平下调为55.9％,P=0.016; SKOV3/DDP-RRM2-RNAi1179(Ⅲ)组RRM2mRNA水平下调为43.1％,P=0.001.其中,以转染Ⅰ组基因沉默率(82.33％)最高,P＜0.001;阴性组(0.008 6％)与空白组(0.008 2％)比较,差异无统计学意义,P=0.133.转染RRM2的不同靶序列72h后RRM2蛋白的表达量最低,Ⅰ组为0.062±

作者：张梦；王蕾；焦金文；张文华；王黎明；王菲；姚如永

来源：中华肿瘤防治杂志 2014 年 21卷 4期