目的 制备人微小RNA-16(miR-16)重组腺病毒,研究其在人骨髓间充质于细胞(hMSCS)中的表达及对细胞周期素依赖蛋白激酶6(CDK6)表达的影响.方法 从人基因组DNA中扩增miR-16前体的DNA,定向插人腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV.将经Pme I线性化的重组穿梭载体pAdTrack-CMV-miR-16与腺病毒骨架质粒pAdEasy- I共转化感受态大肠杆菌BJ5183,在细菌内同源重组获得重组腺病毒质粒rAdTrack-miR-16.将经Pac I线性化的rAdTrack-miR-16在人胚肾293细胞(HEK293 )中包装并扩增出miR-16的重组腺病毒rAd-miR-16.将重组腺病毒感染hMSCs,分别检测miR-16前体和miR-16靶基因CDK6的表达.结果 pAdTrack-CMV-miR-16构建正确,在HEK293细胞中成功包装并扩增出重组腺病毒rAd-miR-16.rAd-miR-16感染的hMSCs中miR-16前体水平显著升高(P<0.05),CDK6mRNA的表达降低不明显,CDK6蛋白表达水平显著降低(P<0.01).结论 成功制备了表达人miR-16的重组腺病毒,并能有效介导 miR-16在hMSCs中的表达,为进行miR-16的功能研究创造了条件.
作者：刘居理；林秋雄；邓春玉；朱杰宁；麦丽萍；余细勇；单志新
来源：热带医学杂志 2011 年 11卷 4期
