背景：Notch信号活化对干细胞分化有重要的影响，其效应具有细胞特异性，但有关Notch信号与c-Kit+骨髓间充质干细胞分化的相关报道较少。目的：分析Notch1信号活化对c-Kit+骨髓间充质干细胞分化的影响。方法：应用PCR从cDNA文库中调取Notch1受体胞内域(N1-ICD)序列，定向克隆入腺病毒穿梭质粒GV314构建重组质粒，与腺病毒辅助包装质粒pBHGlox?E1,3 Cre在HEK293T细胞进行同源重组，获得N1-ICD过表达腺病毒颗粒(N1-ICD-Ad)。分离SD大鼠股骨骨髓间充质干细胞，应用磁激活细胞分选法分选出c-Kit+亚群并用流式鉴定其纯度。将N1-ICD-Ad腺病毒感染c-Kit+骨髓间充质干细胞，8 d后定量RT-PCR或免疫荧光分析c-Kit+骨髓间充质干细胞中Notch1信号的活化及细胞的分化。结果与结论：(1)从cDNA文库中成功获得N1-ICD序列，将此序列成功克隆入线性化GV314载体，抗性克隆经测序证实无误；(2)在辅助包装质粒pBHGloxΔE1,3 Cre的协助下，成功获得滴度为2×1012 PFU/L重组腺病毒颗粒N1-ICD-Ad；(3)成功从SD大鼠骨髓间充质干细胞获得c-Kit+细胞亚群，纯度达91.6
作者：哈艳平；王振良；雷洪；丁然然；蒋晓帆；王可可；申志华；揭伟
来源：中国组织工程研究 2016 年 20卷 6期
