背景:如何将树突状细胞和 T 细胞活化因子运送至肿瘤局部是有待解决的难题之一.利用人骨髓间充质干细胞具有肿瘤趋向性和低免疫原性的特性,将树突状细胞和 T 细胞活化因子导入骨髓间充质干细胞后运送至肿瘤局部表达可能是解决上述难题的方案之一.目的:构建共表达粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素2的5型腺病毒载体(Ad5 GM-CSF-IL-2),感染人骨髓间充质干细胞,检测粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素2的表达水平和持续时间,为体内活化树突状细胞和 T 细胞提供实验依据.方法:提取人外周血单个核细胞总 RNA,以此为模板用 RT-PCR 方法扩增粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素2基因 cDNA,PCR 扩增片段分别插入 pcDNA3.1/Myc-His(-)B 真核表达载体中,再利用脑心肌炎病毒内部核酸进入位点(IRES)序列,构建腺病毒载体穿梭质粒 pDC515 GM-CSF-IRES-IL-2.采用 AdMaxTM FLP 重组腺病毒载体体系,将穿梭质粒 pDC515 GM-CSF-IRES-IL-2与 pBGHfrt△E1,3 FLP 骨架质粒共转染至293细胞,通过重组酶位点特异性重组获得 Ad5 GM-CSF-IL-2.Ad5 GM-CSF-IL-2感染人骨髓间充质干细胞后经γ射线照射使其失去增殖能力,分别用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素2 ELISA 试剂盒在不同的时间点检测细胞上清中粒细
作者：张玉萍；张璇；郭智；谭晓华
来源：中国组织工程研究 2013 年 14期
