背景：软骨调节素Ⅰ是一种糖蛋白，主要在软骨中表达，而在骨髓间充质干细胞中少量表达。结合课题组的前期研究，推断软骨调节素Ⅰ在诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化过程中可能会起促进作用。<br> 目的：构建软骨调节素Ⅰ表达载体，使其在大鼠骨髓间充质干细胞中稳定上调表达。<br> 方法：在大鼠软骨组织中获取软骨调节素Ⅰ目的基因，使用 pcDNA3.1(+)质粒表达载体构建pcDNA3.1(+)/ChM-I 表达载体。密度梯度离心法和贴壁培养法获得大鼠骨髓间充质干细胞。用脂质体法将构建的pcDNA3.1(+)/ChM-I表达载体转染大鼠骨髓间充质干细胞，使用G418稳定筛选转染细胞，用RT-PCR 及Western blot 检测软骨调节素Ⅰ在细胞株内的表达。<br> 结果与结论：对阳性克隆的双酶切鉴定及测序和分析对比，结果显示与软骨调节素Ⅰ基因长度相符并且序列无误，且读码框正确。RT-PCR及western blot检测结果显示，软骨调节素Ⅰ的mRNA及蛋白在骨髓间充质干细胞中稳定的高表达。实验成功构建了pcDNA3.1(+)/ChM-I表达载体，并成功将其转染到大鼠骨髓间充质干细胞中，最终使软骨调节素Ⅰ在大鼠骨髓间充质干细胞中稳定上调表达。
作者：周连仲；崔成华；冯亚；邢双春；翟立杰
来源：中国组织工程研究 2013 年 45期
