目的 从分离培养的金黄色葡萄球菌中提取肠毒素A(SEA)基因,亚克隆入表达载体pET-28a(+),诱导融合蛋白的表达,为肠毒素A应用研究奠定基础.方法 根据GenBank中SEA的序列,设计一对特异性引物,以金黄色葡萄球菌DNA为模板PCR扩增SEA,纯化DNA进行BamH Ⅰ 、Xhol Ⅰ双酶切鉴定及测序鉴定,并与做相应酶切的pET-28a(+)连接,转化大肠杆菌BL21,并对质粒进行双酶切鉴定及基因序列分析,用IPTG诱导融合蛋白的表达,His标签单克隆抗体进行免疫印迹验证融合蛋白的表达.结果 以金黄色葡萄球菌DNA为模板,成功扩增了SEA基因,基因大小为774 bp,重组PET-28a(+)-SEA双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示SEA在正确读框中,序列比对分析显示其与相关报道核苷酸序列一致性达99.9％.经IPTG诱导后,SDS-PAGE可见pET-28a(+)-SEA/BL21在相应分子量(约30 000 Mr)条带大量表达,免疫印迹能检测到目的蛋白条带,说明其与His标签融合表达.结论 克隆了金黄色葡萄球菌SEA基因,并成功在大肠杆菌BL21中融合表达,为肠毒素A应用研究奠定了基础.
作者：周帅；杨镒宇；张妙莲；关锐梨；邓秋连；谢永强；容莉莉；邓力；周珍文
来源：热带医学杂志 2012 年 12卷 9期
