构建并鉴定靶向大鼠TGF-β1基因的短发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）真核表达载体，为探索肝纤维化的基因治疗提供有力工具。根据大鼠TGF-β1基因的mRNA序列设计并合成2条编码shR-NA的特异性寡核苷酸片段，另选通用阴性对照序列HK，将上述片段退火后分别克隆入线性化质粒载体PGenesil-1．1中，构建出含靶基因片段的shRNA真核表达载体PGenesil-TGF-β1-A、PGenesil-TGF-β1-B及PGenesil-HK，行酶切鉴定及测序分析，并采用脂质体介导法体外转染Hela细胞，荧光显微镜观察转染结果。经酶切和测序鉴定证实，构建的shRNA成功插入到载体，重组质粒的插入序列与设计的靶基因片段完全一致，3种重组质粒均能转染入Hela细胞表达绿色荧光。成功构建出靶向大鼠TGF-β1基因的shRNA真核表达载体，为后续研究抗肝纤维化的基因药物奠定了实验基础。
作者：都泓莲；张千；邓存良
来源：生物医学工程研究 2014 年 2期
