目的 以小鼠VEGFa基因为靶基因,构建携带短发夹状干扰RNA(siRNA)的慢病毒载体.方法 设计并合成三对包含靶序列和一对针对无关序列的互补寡核苷酸链,克隆到pRNAT-U6.2/Lenti质粒;从小鼠NIH/3T3细胞扩增、纯化VEGFa cDNA,构建pCDNA-VEGF质粒;实验分6组,pCDNA-VEGF质柱或/和siRNA慢病毒质粒共转染NIH/3T3细胞,筛选最有效siRNA慢病毒表达质粒;将筛选siRNA慢病毒表达质粒和pRNAT-Negative质粒与慢病毒包装质粒混合物混合,共转染293T细胞,48h后收集上清.结果 成功构建针对小鼠VEGFa基因的siRNA慢病毒质粒和质粒pCDNA-VEGF;慢病毒质粒有效抑制pCDNA-VEGF质粒增加NIH/3T3细胞VEGFa表达水平,pRNAT-siR-NA3抑制作用最明显,VEGFa mRNA和蛋白表达分别下降80.O
作者：周炜；冯进波；王旭平；姜虹；刘春喜；王荣；丁士芳
来源：山东大学学报（医学版） 2008 年 46卷 12期
