目的:探讨 siRNA 沉默 PCSK6基因对胶原诱导性关节炎(CIA)成纤维样滑膜细胞(FLS)生物学行为的影响。方法采用牛Ⅱ型胶原诱导大鼠 CIA 模型,取膝关节滑膜组织原代培养 FLS;采用人工合成的 siRNA oligo-433干扰剂、siRNA oligo-688干扰剂、siRNA oligo-2506干扰剂特异性抑制 PCSK6在 CIA FLS 中的表达,阴性siRNA为阴性对照组,瞬时转染24、36 h 后,采用 RT-qPCR 法检测抑制效率,同时检测 PCSK6基因沉默后各相关基因的表达;采用 MTT、Transwell、细胞划痕、流式细胞术、ELISA 等方法检测干扰 PCSK6表达后对细胞增殖、侵袭、迁移、细胞周期和相关炎性因子分泌的影响。结果转染特异性 siRNA-PCSK6后,各干扰组与阴性对照组相比,siRNA oligo-2506干扰剂转染24 h 时,PCSK6 mRNA 水平抑制效果显著(P <0.001),CIA FLS 的增殖受到抑制(P <0.001),细胞的侵袭和迁移能力下降(P <0.001),肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)分泌降低(P <0.001),G0/G1期的细胞数目增多(P <0.05),PCSK6下游基因 CXCL9、MMP2、MMP9、NOSTRIN、HIF-1α、MPZL2、IGF2、PADI4表达均明显下降(P <0.05)。结论PCSK6基因沉默对 CIA FLS 的生物学行为具有一定作用,为进一步研究 CIA
作者:姜慧钰;王林;潘继红
来源:山东大学学报(医学版) 2015 年 12期