目的：优选出pMaxGFP导入人肝癌HepG2细胞中磷酸钙转染法的应用条件。方法取对数生长期的人肝癌HepG2细胞，采用磷酸钙转染法将pMaxGFP导入HepG2细胞，转染前1 h换不同血清浓度的新鲜培养液培养HepG2细胞，血清浓度分别为无血清、1％、2％、5％、10％、15％。转染48 h后以倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达，评估转染效率，同时以原位台盼蓝染色检测转染后的细胞存活率，优选出最适血清浓度。在最适血清浓度条件下，磷酸钙转染法将pMaxGFP转染贴壁状态和悬浮状态的HepG2细胞，共分为A、B、C、D、E 5组，分别代表转染贴壁状态、悬浮状态3×104细胞/孔、4×104细胞/孔、5×104细胞/孔、6×104细胞/孔。转染48 h后在荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白表达，评估转染效率，同时以原位台盼蓝染色检测转染后的细胞存活率，优选出最适的细胞状态和细胞密度。结果48h后，无血清组HepG2细胞大量死亡，而其他组有较少部分细胞死亡。1％、2％、5％、10％、15％血清浓度的转染效率分别为30．92％±1．29％、30．10％±1．05％、21．27％±0．63％、19．10％±0．51％、10．44％±1．42％，血清浓度为1％、2％时的转染效率明显高于其他血清浓度，P＜0．05；1％、2％、5％、10％、15％血清浓度的细胞存活率分别为76．
作者：徐慧；龚霞；彭剑雄
来源：山东医药 2014 年 35期
