目的：观察5-硝基-2（3-苯丙胺）-苯甲酸（ NPPB）在大鼠肝细胞分离中的应用效果，并探讨其可能的机制。方法将12只SD大鼠随机分为观察组和对照组各6只。两组分离肝细胞后，采用改良的四步胶原酶分离技术进行消化，制备肝细胞悬液。观察组在使用灌注液进行消化的过程中加入NPPB。采用血细胞计数板计算肝细胞收获量，PAS染色后计算纯度，0．4％台盼蓝染色后计算成活率。细胞无血清培养24 h后，采用全自动生化分析仪检测上层清液中的白蛋白（ ALB）、ALT。采用紫外线分光光度法检测LDH吸光度，并计算LDH释放率。采用RT-PCR法检测细胞线粒体氯通道蛋白4（ CLIC4） mRNA 表达， Western blotting 法检测细胞 CLIC4蛋白表达。结果观察组与对照组肝细胞收获量分别为（4．41±0．20）×108、（4．40±0．26）×108个，纯度分别为90％±1％、89％±2％，成活率分别为88％±2％、85％±1％；两组比较，P均＞0．05。观察组与对照组ALB分别为（43．8±5．0）、（25．2±3．0）g／L，ALT分别为（47．8±6．0）、（104．3±11．7）U／L，LDH释放率分别为21．0％±2．7％、34．0％±2．4％；两组比较，P均＜0．05。观察组与对照组CLIC4 mRNA相对表达量分别为1．01±0．02、1．62±0．01，CLIC4蛋白相对表达量分别为0．3
作者：梁珊；石詠中；聂盛丹；黄韧；徐伟；李灼日
来源：山东医药 2015 年 32期
